Cara memulai kembali kolom C18

Langkah 1

Lepaskan kolom C18 dari aliran aliran dan ganti kolom ke arah sebaliknya. Menjalankan pelarut kembali melalui kolom ke arah yang berlawanan akan melonggarkan efek pengepakan yang terjadi seiring waktu. Perawatan harus diambil untuk tidak kehilangan sejumlah besar bahan kemasan di ujung kolom. Beberapa produsen menggunakan mesh yang lebih besar pada ujung hulu kolom, sehingga ketika arah aliran dibalik, mesh yang lebih besar berada di posisi downstream. Metode regenerasi ini disebut backwashing. Untuk melindungi terhadap pengepakan material yang mengalir ke dalam detektor sistem dan mungkin menyebabkan sumbat, itu memungkinkan sistem untuk beroperasi tanpa detektor terhubung dan mengarahkan aliran output dari kolom ke limbah.

Langkah 2

Tempatkan tabung inlet pelarut dalam serangkaian pelarut untuk mengelusi senyawa yang ditahan dengan kolom pada arah sebaliknya. Rangkaian pelarut yang digunakan bervariasi dalam karakteristik hidrofiliknya. Dengan memvariasikan pelarut Anda akan mengelusi senyawa-senyawa yang memiliki sifat hidrofilik yang sama-sama bervariasi. Gunakan 50 ml masing-masing pelarut berikut pada gilirannya: air (jika Anda menggunakan buffer dalam pelarut Anda), metanol, isopropanol, diklorometana, heksana, diklorometana dan isopropanol.

Langkah 3

Sambungkan kembali kolom dengan orientasi yang benar dan jalankan pelarut melalui sistem. Gunakan setidaknya 75 ml pelarut untuk mencuci kolom sebelum melanjutkan. Jalankan uji injeksi standar yang Anda jalankan saat kolom masih baru dan periksa hasilnya. Bayar perhatian khusus ke jam retensi maksimum, antrian puncak dan waktu analisis total. Derajat di mana atribut-atribut ini bertepatan dengan pelaksanaan awal dari kolom ketika itu baru akan menunjukkan sejauh mana kolom telah diregenerasikan. Jika hasilnya tidak memuaskan, ganti kolom dengan yang baru dan buang kolom lama di tempat sampah.